激光共聚焦显微镜观测体内回植的GFP标记的3D打印组织工程颌骨

doi:10.13701/j.cnki.kqyxyj.2016.10.005

口腔医学研究 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (10): 1020-1023.DOI: 10.13701/j.cnki.kqyxyj.2016.10.005

激光共聚焦显微镜观测体内回植的GFP标记的3D打印组织工程颌骨

韩祥祯, 周琦琪, 胡杨, 宋艳艳, 何惠宇^*

新疆医科大学第一附属医院口腔修复科新疆乌鲁木齐 830054

收稿日期:2016-02-19 出版日期:2016-10-26 发布日期:2016-10-26
通讯作者: 何惠宇,E-mail:hehuiyu01@126.com
作者简介:韩祥祯(1987~ ),男,河南人,硕士,住院医师,主要从事口腔修复学临床及基础的研究工作。
基金资助:
新疆维吾尔自治区科技厅科技支疆项目(编号:201291173)

Observation of GFP-labeled 3D-printed Jaw using Laser Confocal Microscopy in Vivo.

HAN Xiang-zhen, ZHOU Qi-qi, HU Yang, SONG Yan-yan, HE Hui-yu^*.

Department of Prosthodontics, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China

Received:2016-02-19 Online:2016-10-26 Published:2016-10-26

摘要/Abstract

摘要： 目的:激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protins,GFP)标记的3D打印组织工程颌骨回植后体内移植情况,为筛选组织工程颌骨并为其后续功能研究提供技术基础。方法:采用羊椎骨煅烧制备陶瓷化骨粉,结合聚乙烯醇制备组织工程颌骨支架,复合GFP慢病毒转染的羊骨髓间充质干细胞(Bone Marrow mesenchymal Stem Cells, BMSCs),回植羊颌骨缺损动物模型,使用激光共聚焦显微镜观察不同时间点其体内分布及存活情况。结果:GFP慢病毒转染的BMSCs,流式细胞仪检测转染率为95.4%,基因测序结果与GFP基因一致。回植后使用激光共聚焦显微镜三维立体成像技术观察到GFP标记的BMSCs在组织工程骨支架上存活3个月以上。结论:激光共聚焦显微镜三维重建技术可很好地观察GFP标记的3D打印组织工程颌骨支架上的细胞移植情况,为组织工程骨的动物实验研究提供了很好的观察方法。

关键词: 绿色荧光蛋白, 慢病毒, 组织工程颌骨, 激光共聚焦显微镜

Abstract: Objective: To observe GFP-labeled 3D-printed jaw by using laser confocal microscopy in vivo and to provide technical basis for the follow-up function study. Methods: The calcined ceramic powder was made from sheep vertebrae, which was combined with polyvinyl alcohol to form jaw scaffold. Sheep BMSCs were infected by GFP lentivirus and cultured on the scaffold. The scaffold was implanted into sheep jaw defect and observed by confocal laser scanning microscope at different time points. Results: The infection efficiency was about 95.4% detected by flow cytometry. BMSCs could survive for more than 3 months on the scaffold determined by three-dimensional imaging technique using laser scanning confocal microscopy after implantation. Conclusion: Laser scanning confocal microscopy can be used to observe the GFP-labeled 3D-printed jaw.

Key words: GFP, Lentivirus, Tissue engineering, Confocal laser scanning microscope

中图分类号:

R783.2

韩祥祯, 周琦琪, 胡杨, 宋艳艳, 何惠宇. 激光共聚焦显微镜观测体内回植的GFP标记的3D打印组织工程颌骨[J]. 口腔医学研究, 2016, 32(10): 1020-1023.

HAN Xiang-zhen, ZHOU Qi-qi, HU Yang, SONG Yan-yan, HE Hui-yu.. Observation of GFP-labeled 3D-printed Jaw using Laser Confocal Microscopy in Vivo.[J]. Journal of Oral Science Research, 2016, 32(10): 1020-1023.

参考文献

[1] 韩祥祯,魏薇,何惠宇,等.bFGF重组慢病毒对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的研究[J].口腔医学研究,2015,31(7)∶649-652
[2] 侯天勇,边巴罗布,罗飞,等.绿色荧光蛋白标记结合激光共聚焦显微镜三维重建技术观测组织工程骨的构建和体内移植[J].中国修复重建外科杂志,2010,39(7)∶774-778
[3] Puppi D, Chiellini F, Piras A M, et al. Polymeric materials for bone and cartilage repair [J]. Progress in Polymer Science, 2010, 35(4)∶403-440
[4] Liu X,Liu HY,Lian X,et a1.Osteogenesis of mineralized collagen bone graft modified by PLA and calcium sulfatehemihydrate:In vivo study [J]. BiomaterApp1, 2013, 28(1)∶12-19
[5] ShichinoheH,Kuroda S,Lee JB,et al.In vivotracking of bone marrow stromalcells transplanted into mice cerebral infarctby fluorescence optical imaging [J]. BrainRes Brain Res Protoc, 2004, 13(3)∶166-175
[6] 魏韩笑,赵娴,袁瑞红, 等.兔BP-EPCs对自体BMSCs体外扩增和分化能力的影响研究[J].中国矫形外科杂志,2016,42(1)∶67-72
[7] SchniderA, OvereschG, Korczak BM, et al.Com arison of real-time PCR assays for detection, quantification, and differentiation of camylobacter jejunia-nd camylobacter coli in broiler neck skin sam les [J]. Food Prot,2010,73(6)∶1057-1063
[8] 陈秋月,吴补领,徐稳安,等.GFP转基因小鼠骨髓间充质干细胞纯化方法的研究[J].口腔医学研究,2015,31(4)∶324-326
[9] Shimomura O,Hohason F H,Saiga Y. Extraction,purification and properties ofaequorin,a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan,Aequorea [J]. J Cell Comp Physiol,1962(59)∶223-239
[10] Englert DL, Jayaraman A, Manson MD. Microfluidic techniques for the analysis of bacterial chemotaxis [J]. Methods Mol Biol,2009,57(1)∶1-23
[11] Kishimoto H, Zhao M, Hayashi K, et al. In viv o internal tumor illumination by telomerase- dependent adenoviral GFP for precisesurgical navigation [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2009, 106(34)∶14514-14517
[12] 邢宏运.慢病毒介导绿色荧光蛋白转染人胚胎干细胞的研究[J].中华血液学杂志,2011,32(5)∶349-351
[13] 李宁,朱宝长,朱宛宛,等.慢病毒介导绿色荧光蛋白转染人胚胎干细胞及其培养[J].中华血液学杂志,2008,28(10)∶1083-1087
[14] 代传洋,张永萍,徐剑,等. 激光共聚焦扫描显微镜在中药靶向制剂中研究应用进展[J].贵阳中医学院学报,2016,32(1)∶78-83
[15] Wang CY, Tsai JC, Chuang CC, et al. Aorta fluorescence imaging by using confocal microscopy [J]. ISRN Cardiol, 2011, 2011∶215627
[16] 盛艳梅,谢兴亮,李莎.激光共聚焦显微镜技术在心脑血管疾病实验研究中的应用[J].西部医学,2011,11(12)∶2273-2275
[17] 段勤勤,高青,李开庭,等.芦荟大黄素纳米脂质体介导的光动力对胃癌细胞的作用[J].重庆医科大学学报,2014,27(3)∶305-309

激光共聚焦显微镜观测体内回植的GFP标记的3D打印组织工程颌骨

Observation of GFP-labeled 3D-printed Jaw using Laser Confocal Microscopy in Vivo.

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[1]	张浩, 孙卫斌, 苗雷英, 葛久禹. 不同渗透性材料对早期釉质龋渗透性能影响的研究[J]. 口腔医学研究, 2019, 35(4): 328-330.
[2]	伍云, 赵艳, 季耀庭, 夏海滨, 张壁, 王贻宁. C4orf7在牙周膜细胞成骨分化中的作用及机制[J]. 口腔医学研究, 2018, 34(2): 125-129.
[3]	杨洋, 郑军, 徐江, 顾永清, 黄瑾, 王丹妮, 朱茂祥, 曾妍. Naa10基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对口腔鳞癌细胞生长的影响[J]. 口腔医学研究, 2017, 33(7): 707-711.
[4]	刘苗苗, 张艳, 张偲, 樊明文, 郭继华. 抗STAT3shRNA对树突状细胞成熟影响研究及其靶向防龋DNA疫苗构建[J]. 口腔医学研究, 2016, 32(3): 234-238.
[5]	韩祥祯,魏薇,何惠宇,胡杨,王欢欢,邬薇薇. bFGF重组慢病毒对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的研究[J]. 口腔医学研究, 2015, 31(7): 649-652.
[6]	邵方洋, 杨晓烨, 姜慧茜, 樊江源, 周巧玲, 谷锦超, 郑铁丽. 丙酮基和酒精-水基牙本质粘接系统粘接强度比较及粘接界面观察[J]. 口腔医学研究, 2015, 31(3): 272-275.
[7]	孔楠楠,张文霞,康宏,包广洁. 山羊颞下颌关节盘细胞肌动蛋白骨架的研究[J]. 口腔医学研究, 2015, 31(10): 953-956.
[8]	王欢欢,胡杨,韩祥祯,邬薇薇,何惠宇. 骨形态发生蛋白4慢病毒载体构建及对鼠骨髓间充质干细胞成牙功能影响[J]. 口腔医学研究, 2015, 31(1): 7-10.